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研域(上海)生物幫您整理ELISA實驗操作要點樣本的技巧

2024-01-18 [1242]

研域生物幫您收集整理三類樣本的技巧: 由于ELISA實驗只能檢測可溶性蛋白質(zhì)的含量,因此要求樣本應(yīng)清晰透明并離心除去沉淀物或懸浮物質(zhì)。為確保實驗的準(zhǔn)確性, -20℃或-80℃保存的樣本應(yīng)在1-6個月內(nèi)完成檢測,4℃保存的樣本在一周內(nèi)完成檢測。此外,樣本中不能含有會抑制HRP活性的NaN3,否則會造成假陰性結(jié)果??捎糜贓LISA實驗的樣本一般有血清、血漿、尿液、細胞培養(yǎng)上清以及組織勻漿等。不同樣本類型的預(yù)處理方法也不同。適當(dāng)?shù)臉颖绢A(yù)處理是確保ELISA實驗正確性和準(zhǔn)確性的第一步。這里,我們將介紹幾種不同樣本類型的處理方法。

ELISA

血清

血清是ELISA實驗的樣本,其預(yù)處理也十分簡單。使用無熱原無內(nèi)毒素的試管或離心管采集血液樣本,將試管或離心管在室內(nèi)溫度下放置自然凝固(視室溫環(huán)境10分鐘到2小時不等)或4℃過夜,分離出血清,(建議傾斜試管或離心管以擴大液面的橫截面,使血清能更大程度的分離出來,),2-8℃條件離心5分鐘左右(5000-6000轉(zhuǎn)/分鐘),仔細收集上清,立即進行測定,建議在-20℃或-80℃下將收集的血清分裝保存,避免反復(fù)凍融,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。

注意事項:

在收集血液樣本的過程中應(yīng)避免溶血,因為紅細胞在溶解時會釋放具有過氧化物酶活性的物質(zhì),這種情況下,ELISA實驗中將會出現(xiàn)非特異性顯色反應(yīng),導(dǎo)致檢測結(jié)果不準(zhǔn)確,出現(xiàn)假陽性結(jié)果。另外,樣本還應(yīng)避免細菌污染,因為細菌可能含有內(nèi)源性HRP,也會導(dǎo)致檢測結(jié)果不準(zhǔn)確。

血漿

應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、肝素鈉、枸櫞酸納或檸檬酸鈉作為抗凝劑,使用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液樣本,采集后30分鐘內(nèi),混合10-20分鐘后,2-8℃條件離心5分鐘左右(5000-6000轉(zhuǎn)/分鐘),仔細收集上清液(血漿),建議在-20℃或-80℃下將收集的血清分裝保存,避免反復(fù)凍融。樣本應(yīng)避免溶血或高血脂。保存過程中如有沉淀形成,使用前應(yīng)該再次離心。

注意事項:

檢測前請仔細閱讀ELISA試劑盒說明書,查看該試劑盒針對抗凝劑是否有特殊要求。

尿液

用無菌管收集,2-8℃條件離心5分鐘左右(5000-6000轉(zhuǎn)/分鐘)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

細胞培養(yǎng)上清

檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。將細胞培養(yǎng)上清液吸入離心管中并以2-8℃條件離心5分鐘左右(5000-6000轉(zhuǎn)/分鐘),除去細胞碎片和雜質(zhì),收集上清液備用,樣本保存在-20℃或-80℃,避免反復(fù)凍融,保存過程中如有沉淀形成,使用前應(yīng)再次離心。

腦脊液

用無菌管收集,2-8℃條件離心5分鐘左右(5000-6000轉(zhuǎn)/分鐘),仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,使用前應(yīng)再次離心。(采集大鼠腦脊液)的方法:采集腦脊液時,用濕紗布擦試大鼠頸背部皮膚,剪去背毛暴露皮膚。兩耳連線剪一橫切口(1. 5cm左右),在其中點向尾側(cè)沿皮下剪開2cm,將皮分離兩側(cè),擴大視野。緊貼大鼠頭骨依次逐層剪切各肌層,并斷端依次拉向尾側(cè)擴大視野。注意,有出血時用干紗布按壓止血,保持術(shù)口清晰。接近頸后黃韌帶時,小心地用7號注射針頭分離覆蓋的肌肉,暴露寰枕膜。用1ml注射器(針頭用止血鉗使針尖與針體成150度鈍角),針斜面向上,近水平刺入蛛網(wǎng)膜下腔,固定針體,緩慢抽取腦脊液,一般采集量為100-200微升。)

唾液

用無菌管收集,2-8℃條件離心5分鐘左右(5000-6000轉(zhuǎn)/分鐘),仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,使用前應(yīng)再次離心。

以上是研域(上海)生物幫您整理ELISA實驗操作要點樣本的技巧,希望可以幫助到大家!

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